很多人对革兰染色法都不了解是怎么回事，这是一种在细胞学很常使用的一种鉴别染色方法，是一种复染发，在一八八四年一个丹麦医生发明的染色方法，分为四个步骤，初染、媒染、脱色、复染等等。大多数人对于革兰染色法的步骤不了解，下面让小编给大家介绍。革兰染色法的步骤。
第一，革兰染色法的步骤是什么？操作步骤：涂片将培养的不同菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚)，干燥、固定。固定时通过火焰1一2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
.染色( 1 )初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
( 2 )媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
3 )脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 %酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20一30秒钟，立即用水冲净酒精。( 4 )复染用番红液染1一2分钟，水洗。
( 5 )镜检干燥后，置油镜观察.革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
6 )同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
第二，革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gr二创立的。革兰氏染色法(Gram stain )不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示：染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌，用G一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰染色法的步骤，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色;革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液(番红)的颜色，因此呈现红色。