什么叫双缩脲反应?双缩脲反应是肽和蛋白所独有的，而为碳水化合物所沒有的一种颜色反应。一般分子结构中带有2个羟基甲酪基(即肽键：-CO-NH-)的化合物与碱性溶液功效，转化成蓝紫色或是紫蓝色的络离子。
在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)与碘离子(Cu2)功效，产生暗紫色络离子(该物质的分子化学结构式，该反映即双缩脲反应。
铜水溶液功效，便会产生蓝紫色或紫蓝色络离子。
注：除-CO-NH-有此反映外，氟苯(-CONH2)、亚甲基(-CH2-)、亚氨基(-NH-)、(-CS-CS-NH2)等官能团亦有此反映。
因为蛋白质分子中带有许多与双缩脲构造类似的肽键，因而也可以与碘离子在碱性溶液中产生双缩脲反应，且色调浓淡与蛋白的成分的关联在一定范畴内合乎比尔基本定律，而与蛋白的碳水化合物构成及含量不相干，故能用双缩脲测定方法蛋白的成分(依靠光度计可减少偏差)。
双缩脲反应关键涉及到肽键，因而受蛋白特异性影响较小。且应用实验试剂质优价廉容易得到，实际操作简单，可测量的范畴为1～1b250g蛋白，适合精密度规定不太高的蛋白质含量的测量，能测到的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺陷是精准度低、所需试品量大。影响此测量的物质包含在特性上是碳水化合物或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，由于他们造成呈阳性呈色反应，碘离子也非常容易被复原，有时候出現鲜红色沉定。
双缩脲试剂由NaOH水溶液(0.1g/mL)和CuSO4水溶液(0.01g/mL)配置而成，配置占比为5：1。可是双缩脲试剂无需现配现用，先添加NaoH构建偏碱自然环境，再添加CuSO4。它是与斐林试剂不一样的地区。